Consumo voluntario y ganancia de peso en corderos alimentados con ensilaje de Cenchrus purpureus Schum y Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray
Voluntary inteke and weight gain in lambs fed silage of Cenchrus purpureus Schum and Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray
Vilma Holguín Castaño 1
Sanín Ortiz Grisales 2
Alexandra Huertas 3
Clemencia Fandiño 4
Jairo Mora-Delgado 5
1Doctora en Ciencias Agrarias. Universidad del Tolima, Ibagué, Colombia.
2Doctor en Ciencias Agropecuarias. Universidad Nacional de Colombia, Sede Palmira. Colombia
3Est. Maestría. Universidad del Tolima, Ibagué, Colombia.
4Lic. Bacteriología y Ciencias Naturales. Universidad del Tolima, Ibagué, Colombia.
5Doctor en Sistemas de Producción Agrícola Tropical Sostenible. Universidad del Tolima, Ibagué, Colombia.
1vholguin@ut.edu.co
2sortizg@unal.edu.co
3 mahuertasg@ut.edu.co
4 lfandino@ut.edu.co
5 jrmora@ut.edu.co
Resumen
Se realizó este ensayo para evaluar el efecto en el consumo voluntario de materia seca y ganancia de peso en corderos duarte la etapa de crecimiento con ensilajes de Cenchrus purpureus (CP) y Tithonia diversifolia (TD) comparados con un control de C. purpureus al 100%. Los datos se analizaron en un diseño totalmente al azar con cinco repeticiones. Se emplearon 10 ovinos mestizos de razas Santa Inés y Dorper, destetados de tres meses de edad y peso promedio de 23.5±1.5 kg, divididos en dos tratamientos: T1 CP 100% y T2 CP / TD en una proporción de 67/33%, respectivamente. El ensilaje se ofertó como ración base durante 61 días y se suministró la harina de arroz como suplemento energético (277g/animal) y sal mineral a voluntad. Al inicio, intermedio y final del experimento se controló o registró el peso individual, mientras que el consumo fue diariamente en dos momentos ocasiones (7 am y 3 pm). El consumo promedio durante el periodo experimental fue de 322.6±65.3 y 410.2±65.3 Kg MS. animal. día-1 para T1 y T2, respectivamente. La ganancia diaria de peso fue 63,3 ± 22.82 g. animal. día-1 para el tratamiento T2, respecto a una ganancia negativa para T1. Se concluye que la dieta de ensilaje de la mezcla C. purpureus / T. diversifolia fue tuvo un mayor consumo voluntario, lo cual se refleja en una mayor ganancia de peso corporal, a niveles de suplementos de alta calidad proteica.
Palabras clave: Alimentación; forraje leñoso; pequeños rumiantes.
Abstract
The aim of this study was to measure the effect on the voluntary consumption of dry matter and the weight gain in lambs during the growth stage with silages of Cenchrus purpureus (CP) and Tithonia diversifolia (TD) compared with a control of C. purpureus 100%. The data were analyzed in a random design with five repetitions. We used 10 crossbred lambs of Santa Ines and Dorper breeds, weaned three months of age and average weight of 23.5 ± 1.5 kg, divided into two treatments: T1 CP 100% and T2 CP / TD in a proportion of 67/33%, respectively. The silage was offered as a base ration for 61 days and the rice flour was supplied as an energy supplement (277g / animal) and mineral salt at will. At the beginning, intermediate and end of the way in which the weight of the individual can be controlled, while consumption was made in a time between 7:00 p.m. and 3 p.m. The average consumption during the experimental period was 322.6±65.3 and 410.2±65.3 g DM.animal.day-1 for T1 and T2, respectively. The daily weight gain was 63,3 ± 22.82 g.animal.day-1 for the treatment T2, with respect to a negative gain for T1. It is concluded that the silage diet of the mixture C. purpureus / T. diversifolia has a higher voluntary consumption, which refers to a greater gain of body weight, to levels of high protein quality supplements.
Keywords:Feeding; small ruminants; woody forage.
Introducción
La producción ovina representa una actividad importante en la economía colombiana y comienza a perfilarse como un renglón pecuario de interés para la seguridad alimentaria nacional y regional, ya que además de proveer productos de consumo directo a la población humana, genera ingresos económicos para la familia (Flórez y Uribe, 2015). Los ovinos de pelo juegan un papel muy importante a nivel social para la población rural y comunidades indígenas del país, ellos proporcionan alimento, ofrecen medios para la conservación cultural y de la economía rural, también cuenta con grandes posibilidades para suplir mercados rentables (Arcos et al., 2002).
La cadena de ovinos en Colombia es relativamente joven en comparación con los bovinos, porcinos y la de avicultura (Osorio, 2012). A raíz del auge del consumo de carne de ovino a nivel Nacional y Mundial hoy día la cadena ovina es considerada a nivel estatal como una de las explotaciones promisorias de desarrollo económico para el país, los productores del sector han impulsado su interés en incrementar la productividad de los sistemas productivos, por tal motivo es importante rescatar las costumbres y saberes de las familias campesinas quienes durante décadas han llevado a cabo esta actividad de manera artesanal extensiva (CORPOICA-SENA, 2009; Arcos et al.,2002).
Importante tener en cuenta, que el desarrollo tecnológico e industrial del sector en los últimos años se ha enfocado a transformar las explotaciones ovinas artesanales o con baja tecnología que existen en Colombia (ASOOVINOS, 2010).
Se necesita desarrollar sistemas de producción basados en estrategias alimentarias que sean adoptadas por los productores para reducir el impacto negativo sobre el ambiente y mejorar la eficiencia de uso de recursos naturales en los sistemas de producción, en aras de reducir el efecto estacional, causante de épocas de escases de forraje, reducir la producción y así contribuir a mejorar el nivel de vida de los productores pecuarios (Mendieta-Araica, 2011).
Especialmente en la zona de vida bosque seco tropical, la alimentación de rumiantes presenta serias limitaciones por la escasez de oferta forrajera durante la temporada de sequía (Fujisaka et al.,2005). Además la calidad de los forrajes se ve afectada por diversos factores como el stress hídrico que incide en el deterioro de las pasturas y alta lignificación de las paredes celulares, la que incide en la digestibilidad y la reducción de la disponibilidad proteica (Rúa, 2007).
De igual forma, la dependencia de un reducido número de especies vegetales, desaprovechando el valor nutritivo de la diversidad de especies presentes en los ecosistemas tropicales y que actualmente están siendo subutilizadas (Rosales, 1999), despierta el interés por la investigación con especies no convencionales con potencial forrajero y cuya oferta de nutrientes puede diferirse a través del año, especialmente para las épocas de escases (Holguín, 2005 y Wattiaux, 2000).
Para ello, las técnicas de conservación basadas en la fermentación anaeróbica constituyen una estrategia de conservación y optimización de los nutrientes (Gonzales, 1994). Una de estas especies es Tithonia diversifolia (TD). El género Tithonia comprende 10 especies, todas originarias de México o Centro América, una de ellas, T. diversifolia (Hemsl.) Gray, fue introducida a las Indias Occidentales y a Ceilán. (Ríos & Salazar, 1995; Nash, 1976). Como planta forrajera ha demostrado versatilidad en el manejo con consumos voluntarios de materia seca entre 13 a 15 kg.día-1 en bovinos en pastoreo (Mejia-Diaz, et al., 2015). Esta especie ha sido estudiada por varios investigadores en su distribución (Ruiz et al., 2012; Zapata & Silva, 2010), taxonomía y aspectos fenológicos (Otusanya & Ilori, 2012; Olabode et al., 2010; Muoghalu, 2010), desempeño agronómico (Achieng et al., 2010) y nutricional (Fasuyi & Ibitayo, 2011a). No obstante, aún hay vacíos de conocimiento, especialmente sobre la optimización del forraje mediante procesos de conservación, pero hay evidencias preliminares que conserva su calidad mediante procesos de ensilado (Fasuyi et al., 2010b).
Es urgente realizar trabajos de investigación que desarrollen las potencialidades del valor nutritivo y las propiedades de especies forrajeras promisorias, como es el caso deTD, en mezcla con una gramínea ensilada con forrajes tradicionales usados por los ovinocultores.
El objetivo de este artículo es verificar el efecto de la inclusión deTDen un ensilaje de gramínea midiendo la ganancia de peso de ovinos de pelo.
Materiales y Métodos
El estudio se realizó en la granja experimental Mario González Aranda de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Palmira (Departamento del Valle del Cauca); con una precipitación promedio anual de 1.000 mm, una temperatura promedio de 24°C y altitud sobre el nivel del mar de 1.000 m ubicada entre los 3°30´29” N y 76° 18´ 45” O. Esta zona está clasificada como bosque seco tropical (Holdridge, 2000). El estudio se realizó durante el periodo comprendido entre el 20 de marzo al 4 de junio del 2016. Los animales fueron alojados en corrales (3.70 x 8.30 m), techado con patio y frente de comedero (3 m) disponible el numero animales por tratamiento, con acceso al agua y sales minerales a libre voluntad (Figura 1).
Figura 1. Corral de alojamiento de ovinos durante el experimento (Holguín 2016)
Animales y tratamientos. Se utilizaron 10 corderos machos enteros, con peso promedio de 23.5±1.5 kg. El experimento se desarrolló durante 61 dias, con un periodo de acostumbramiento previo de 15 días para los animales.
El pesaje de los animales se realizó al inicio, intermedio (30 días) y al finalizar el experimento, todos los pesajes se hicieron a las 7:00 am en ayunas. El primer pesaje se realizó después de 5 días de acostumbramiento a la dieta experimental y 10 días a los diferentes tratamientos (Tabla 1).
Tabla 1. Pesajes de los animales al inicio de la etapa experimental para la evaluación de dietas de C. purpureus solo y en mezcla con T. diversifolia
Tratamiento |
Peso inicio del experimento |
T1 |
23.3±1.4 |
T2 |
23.6±1.9 |
Total |
23.5±1.5 |
Para los pesajes se utilizó una báscula gramera electrónica marca Crane Scale. Para determinar la diferencia del peso final menos el inicial y se dividió entre el número de días del período experimental. El consumo de materia seca, fue a razón del 3.5% PV, en base a los requerimientos descritos en el manual básico de nutrición y alimentación de ganado ovino de Castellaros et al. (2015).
Los tratamientos fueron: T1: Ensilaje de C. purpureus Schum (CP) + harina de arroz; T2: CP (67%) + y de Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray (TD) (33%) + harina de arroz.
La harina de arroz fue suministrada, al momento de suministro de la dieta en mezcla con la dieta, como fuente de energía en igual proporción para ambos tratamientos (277 g/animal). La composición de la harina de arroz fue de de 91% deMS; 11.3% de PC; 27.4%de(FDN) y 14.3% de (FDA), según el análisis bromatológico realizado por Díaz (2014)
Elaboración del Ensilaje.
El forraje de C. purpureus Schum y de Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray se cosecho a los 60 y 90 días respectivamente, además se les realizó un pre secado oreando el forraje, reducir la humedad hasta un nivel de ensilabilidad. Luego, se redujo la partícula a 2 cm. En un molino de tres cuchillas, 7.5 HP, 1400 rpm y 4.5 AmperiosMarca Gaitán.
Una vez picado el forraje por separado de las dos plantas, se procedió a mezclar y a asperjar por capas el inoculo de LAB T735, a una concentración de 30 x 107 ufc/ml. Los ensilajes fueron enriquecidos con un inoculo de Lactobacillus paracasei (T735). Las cepas bacterianas usadas como aditivos del ensilaje se produjeron en el Laboratorio Clínico de la Universidad de Tolima con el protocolo siguiente: se tomó una alícuota de 50 g de forraje de(TD), se le añadieron 450 ml de agua de peptona tamponada (1/10). Se realizaron diluciones seriadas (10-2, 10-3, 10-4, 10-7) y se cultivaron en agar MRS. (Placas de Petri) y se incubaron a 37°C durante 72 horas en condiciones anaeróbicas (Holguín, 2016). Así se preparó 3.3 t de CP y 3.1 t de la mezcla TD/CP a una proporción de 33% y 67% respectivamente, por ser la proporción más adecuada en términos de ensilabilidad y de valor nutricional como se demostró Holguín (2016).
El llenado y compactación de las bolsas de los ensilajes se realizo con una maquina compactadora marca INVENTO con un rendimiento de 0.4 t.h-1. Se utilizó doble bolsa de polietileno negra calibre 7, las cuales fueron almacenadas sobre estibas de madera durante 90 días.
En la tabla 2 se observa la calidad bromatológica del ensilaje el cual se realizó en el laboratorio de forrajes del CIAT, en el cual sedeterminó fibra detergente neutra (FDN), fibra detergente ácida (FDA), según el método descrito por (Van Soest & Wine, 1967), proteína cruda (PC) según el método de Kjeldahl (Nielsen, 1994) y Materia seca (MS) y cenizas por medio del método de residuo mineral fijo descritos por la AOAC (1990) en una estufa (PresitionTM) a 63°C durante 72 h. La DIVMS fue determinada por los procedimientos AOAC 984.13.
Tabla 2. Composición bromatológica de las dietas.
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|
T1 |
T2 |
||
|
|
CP (100%) |
CP /TD (67%/33%) |
||
Variable |
|
Media |
D.E. |
Media |
D.E. |
MS |
% |
16.7 |
0.00a |
17.1 |
0.01a |
PC |
% |
5.55 |
0.64a |
7.80 |
1.13a |
FDN |
% |
74.05 |
0.11a |
65.09 |
0.07b |
FDA |
% |
51.02 |
0.00a |
49.92 |
0.18a |
Cenizas |
% |
12.51 |
0.01b |
10.91 |
0.07a |
DIVMS |
% |
63.80a |
|
65.83b |
|
Balance nutricional
Para el balance nutricional, los requerimientos de consumo de materia seca (CMS), EM y PC fueron estimados con base en las formulas usadas por Huerta (2001); la EMn se derivó multiplicando EM por el factor Km (Chay-Canul et al., 2017).
La oferta en la dieta de MS, fue calculada con base en la cuantificación del rechazo de la ración multiplicado por el porcentaje de MS determinada, tanto para el ensilaje como para la Harina de arroz. La energía se estimó con base al cálculo de NDT usando la ecuación de Roche-Junios et al (2003) con base a la Energía digestible: Y = 3,0004 + 0,9553X, donde Y son los NDT y X es la DIVMS. La ED se estimó con base a la ecuación ED (Mcal/kg) = % NDT x 0.04409 (Bauza, 2012) ; la EM se derivó con base a la relación promedio para rumiantes de EM/ED 0 0,82 (Bauza, 2012).
Análisis Estadístico
Los datos fueron analizados mediante un ANDEVA con un diseño completamente aleatorizado, con dos tratamientos (T1: ensilaje de CP al 100% y T2: ensilaje de la mezcla CP/TD al 67 y 33%, respectivamente) con cinco repeticiones por tratamiento. Se empleó el siguiente modelo estadístico:
Dónde: Y= variable de respuesta a evaluar en el tratamiento i, repetición j; Ti = efecto del tratamiento i; Eij = error experimental
Para la separación de medias se recurrió a la prueba de Tukey y el nivel de significación pre-establecido fue del 5%. Para el análisis de los datos se empleó el paquete estadístico Infostat (Di Rienzo, 2008).
Resultados y Discusión
El consumo promedio diario de MSen los animales alimentados con ensilaje de pasto Cenchrus purpureus (T1) fue 323.0±65.3 g y de 410.2±65.3 para los alimentados con ensilaje de C. purpureus / T diversifolia (T2), con diferencias estadísticas entre éstos (P<0.0001). Cabe aclarar que esta materia seca consumida en T1 proviene del ensilaje en un 52% y de la harina de arroz en un 48%; igualmente, en T2, la materia seca fue aportada en un 66% por el ensilaje y en un 34% por el suplemento.
El consumo real de MSpara los tratamientos T1 y T2 fue, respectivamente, de 3.6% y 3.5% del peso vivo de los animales en la etapa final, lo cual se explica por mayor concentración de FDN en la dieta T1, deprimiendo la ingesta. Estos niveles de consumo de MSfueron más bajos de los estándares reportados en diferentes estudios. Castellaro, et al. (2015) reportaron valores del 4%, por su parte, González (1990)y Bossiere (1998) registran valores de 5%, para ovinos tropicales.
En la tabla 3, se observa que T2 obtuvo el mayor peso final (p = 0,0035). Este efecto de mayor ganancia de peso pudo estar determinado, por una parte, por el aporte nutritivo de la dieta con mayor contenido proteico y, por la otra, a la mayor ingesta deMSen T2.
Los valores de incremento de peso (IP), entre el peso inicial y el peso final, denotan valores de 3.86±1.39 kg/animal para el tratamiento T2 y una pérdida de peso para el T1. La misma respuesta positiva a la ganancia diaria de peso (GDP) se obtuvo en los 61 días evaluados para T2 (63,3 ± 22.82 g). Estos resultados fueron superiores a los reportados por Medina & Sánchez, 2006 y Estrada et al. (2002), con valores entre 0.044 y 0.051 Kg/animal/día, con dietas suplementadas con Leucaena y bloques multinutricionales, respectivamente. En el mismo sentido, los valores fueron ligeramente superiores respecto al estudio de suplementación con fuentes proteicas leñosas (Guazuma ulmifolia, Gliricidia sepium y Senna spectabillis) realizado por (Díaz, 2014) quien obtuvo ganancias diarias de peso de 0.048, 0.049 y 0.053 Kg, respectivamente y muy superiores a los reportados por Combellas & Rueda (1998) y (Coronado & Abzueta 2001), entre 12 y 24 g/animal/día. Sin embargo, estos resultados fueron inferiores al compararlos con resultados de dietas suplementadas con otras fuentes proteicas, con ganancias entre 0.085 y 0.116 Kg/animal/día (Espinoza et al.,2001; Mendoza et al.,2001 y Clavero et al.,1995). Respecto al consumo individua de materia seca, los valores obtenidos en este estudio resultan inferiores a otros reportados para los ovinos en el trópico de 68 y 88 g Kg PV075 alimentados con gramínea y diferentes fuentes proteicas (González-Garduño et al., 2011).
Tabla 3. Parámetros productivos en ovinos de pelo sometidos a dos dietas ensiladas de Cenchrus purpureus y Tithonia diversifolia
|
T1 |
T2 |
p valor |
Atributo |
|||
Periodo experimental (días) |
61 |
61 |
|
Consumo alimento (Kg.MS) |
19.7±4.0 |
25.0±4.0 |
0.0667 |
Consumo promedio/día (g) |
322.6±65.3 |
410.2±65.3 |
0.0667 |
Consumo metabólico (g.KgPV0,75) |
32.4±6.8 |
36.1±6,5 |
0,4789 |
Peso inicial (Kg) |
23.4±1.6 |
23.6±1.9 |
0.1755 |
Peso final (Kg) |
19.60±3.25 b |
27.46±2.82 a |
0.0035 |
IP (Kg) |
-3.80±3.79 b |
3.86±1.39 a |
0.0083 |
GMD (g) |
-62,3 ± 62.1 a |
63,3 ± 22.82 b |
0.0083 |
CA |
-5,2±57.5 |
6.5 ± 1.43 |
0.4263 |
|
|
|
|
GPP: ganancia de peso en periodo; GMD: ganancia media diaria de peso. CA: conversion alimenticia; T1: Cenchrus purpureus (100%); T2 Pennisetum prurpureum (67%) + Tithonia divesifolia (33%)
Valores con letra diferente tienen diferencia estadística significativa (p<0.05).
La relación entre los requerimientos nutricionales y la oferta de nutrimentos en la dieta permite realizar un balance nutricional (Tabla 4). Los datos, permiten inferir que el suministro de proteína desde el inicio y consumo total fue bajo. Factor que debió limitar disponibilidad de N y de energía para el desarrollo de la actividad enzimática de los microrganismos ruminales, causa suficiente para deprimir el consumo voluntario de materia seca de la ración y el desempeño productivo de los animales
Lo anterior se refleja en el indicador de conversión alimenticio (CA), donde los valores sugieren que fue mayor la eficiencia de T2 en el cual solo se requirieron 6,5 kg de MSdel ensilaje para producir un kilo de carne, respecto a una relación negativa en los animales alimentados con una dieta convencional basada solo en pasto.
La relación entre requerimientos nutricionales y el aporte de nutrientes en la dieta denota un desbalance (Tabla 4.) De hecho, tanto el CMS, como la PC y la EM son deficitarias. La depresión en el consumo de materia seca posiblemente esté relacionada con el desbalance nutricional (Araujo-Febres, 2005). El factor más importante en determinar la ingesta total de energía, es el consumo voluntario, de hecho los rumiantes poseen mecanismos que regulan el consumo de materia seca en función del balance energético, así, cuando los animales reciben una dieta de baja calidad, la digestión ruminal y la fatiga son posiblemente los mayores estímulos que interaccionan para reducir el consumo (Preston y Leng, 1989). Es evidente, que entre los dos tratamientos, es T1 el de menor calidad dada la más baja digestibilidad, la cual está relacionada con un mayor porcentaje de FDA; esta fracción está compuesta de celulosa y lignina, y la digestibilidad de los alimentos está relacionada con esa fracción de la fibra, por ser la lignina una fibra indigerible (Gerude-Neto et al., 2016). Por su parte, el mayor contenido de FDN en la dieta restringe el consumo por limitar el llenado, en virtud de una disminución de la velocidad de pasaje lo que restringe la ingestión de materia seca (Araujo-Febres, 2005).
Por otra parte, Forbes (1986) señala que dietas con concentraciones bajas de proteína restringen el consumo, ya que bajos niveles de N en la dieta disminuyen la tasa de pasaje de la digesta y limitan la fermentación ruminal (Ruiz y Vásquez, 1983) y reducen la degradación de la celulosa.
Tabla 4. Requerimientos, oferta de nutrientes y balance nutricional
T1 |
T2 |
|
Requerimientos |
||
CMS (kg PV0.75d-1) |
77,72 |
78,99 |
EM (Mcal.kg-1) |
1,19 |
1,21 |
ENm (Mcal.kg-1) |
0,79 |
0,80 |
PC (g.d-1) |
76,61 |
77,41 |
Consumo |
||
MSd |
322,60 |
410,20 |
CMS (kg PV0.75d-1)) |
32,4 |
36,1 |
EM (Mcal.kg-1) |
0,88 |
1,09 |
PC (g.d-1) |
26,38 |
36,46 |
NDT (%) |
63,95 |
65,89 |
ED(Mcal.kg-1) |
2,82 |
2,90 |
EM (Mcal.kg-1) |
2,72 |
2,65 |
ENm (Mcal.kg-1) |
1,79 |
1,75 |
Déficit |
||
CMS (kg PV0.75d-1)) |
-44,72 |
-42,86 |
PC (g.d-1){ |
-50,23 |
-40,96 |
EM (Mcal.kg-1) |
-0,31 |
-0,13 |
CMS: consumo de materia seca; CMSd: materia seca diaria; EM: energía metabolizable: ENm: energía neta de mantenimiento; PC: proteína cruda; MSd: materia seca día; NDT; nutrientes digestibles totales; ED: energía digestible;
No obstante el déficit, al analizar el aporte de proteína en cada tratamiento, se confirman la importancia de incluir un 33% deTDen la dieta, con lo cual se incrementa el aporte diario de PC, ya que que aunque ambos tratamientos son deficitarios, el T2 representa una mejora respecto a las dietas tradicionales de los ovinocultores quienes solo mantienen sus animales con dietas de gramíneas similares a T1. Esto significa un incremento de un 38% en el aporte diario de proteína para el animal.
Conclusiones
Los datos sugieren una ventaja de la inclusión de Tithonia diversifolia en un ensilaje de gramínea, la cual se expresa los valores de ganancia de peso de ovinos de pelo, del T2 respecto al T1. Aunque esta ganancia de peso no es comparable a las obtenidas con alimentación balanceada si sugieren una respuesta positiva a la inclusión de TD
La mejor respuesta animal en ganancia de peso se observó en animales alimentados con ensilaje de Cenchrus purpureus y Tithonia diversifolia en una proporción de 67% y 33% respectivamente, respecto a la dieta convencional de solo Cenchrus purpureus .
Se demostró efecto de la mejor calidad del ensilaje representada en mejores indicadores bromatológicos como un mayor aporte de proteína cruda y valores más bajos de pared celular, lo cual se refleja en una mayor digestibilidad de la MS y por lo tanto el consumo.
Agradecimientos
A la Universidad Nacional de Colombia, Sede Palmira por facilitar los espacios para el experimento (al Sr Jairo Soto yDon Ángel,por su apoyo incondicional); al CIAT por permitir el uso de equipos y análisis de laboratorio y a la Oficina Central de Investigaciones y Desarrollo científico de la Universidad del Tolima, por el financiamiento de este estudio.
Literatura citada